单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抵抗能力外来物种非特异朋友、寡核苷酸体现成本价激昂或工作步骤缜密。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯教受团对在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低费用、跨动物群、全服务平台兼容的全新解决方案。

杂志期刊介简

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由全国人完美院基因基因隔代遗传规律病与阴茎发育生物体技术工程学探析所和全国人基因基因隔代遗传规律病掌握举办单位的全国学界科研刊物，专业专注于简讯生命力完美和医疗基因基因隔代遗传规律病学区域的亚无性探析研究方向。JGG 2023年度作用指数7.1，Scopus学界科研刊物评价语因素CiteScore 9.9，居首JCR 2023年度GENETICS & HEREDITY区域Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY区域Q1区，居首全国人完美院科研刊物划分生物体技术工程学专业类别1区(Top科研刊物)，基因基因隔代遗传规律病学和生物体化学与分子结构生物体技术工程学小类双1区。

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哪些是HEATag

得当的“二融合”设定

HEATag是由凝集素和HUH内切酶购成的容合蛋白酶

「确定器」摸块 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化修饰语（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「链接器」接口 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）数据库索引长条码确定共价接连。

“1+1>2”的使用效果：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样板标示与溯源系统。

Fig1: HEATag强有力的加密管控标签方法表示图

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实操抽样检查

HEATag真不知道有大多能打？

能在各种经济条件下，构建哺乳期動物癌细胞膜系单癌细胞膜混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。科学研究创业团队为 HEATag 设为了多轮 “气压测量”，从组织系系到组织系核，从常温的到超高温，从新鲜样版到放置样版，全位子核验它的维持性和靠得住性。

首先轮测试软件争对母乳喂奶节肢动物肿瘤生殖内部系：学习人员管理选定了出自于人、鼠、仓鼠几个鱼类的多种肿瘤生殖内部（HEK293T、K562、MEF、CHO），在温度使用 HEATag 标识后混合着测序。终于二手回收的 11447 个肿瘤生殖内部中，85.66% 都能利用 HEATag 长条状码查询正确符合到原鱼类，样板间相交生态破坏较少，UMAP 聚类算法浅析也同时证实，HEATag 长条状码查询与鱼类特女性朋友人类基因组优点位置高度。 立刻，测量條件进一大步发展：钻研人数试穿在 4℃下箭头最清新人体神经人体细胞系系、在室内温度下箭头甲醇一定人体神经人体细胞系系，而且就直接箭头人体神经人体细胞系系核。造成的从未全场最佳：所有的條件下，子样板产品标签与种类信息内容均存在特别好的关联性，分拆更成功率超 95%。若果甲醇一定会造成的中度的转录本交叉性感染，人体神经人体细胞系系核准备会起少量的 RNA 轻易流失，人体神经人体细胞系系类形的注解造成的从未与最清新子样板做到不一样的，声明书 HEATag 应该箭头不一样的净化处理條件下的实验报告子样板。

Fig2: HEATag 可在各不相同标准下完成任务单血细胞转录组混样具体分析

可标示辅乳家禽和海洋能无脊梁骨家禽的原代癌细胞

假若说細胞系自测是 “基本知识题”，那团队样表只是 “扩展题”， 这样样表之所以因細胞型复杂化、周围环境认知性特出，称为标上系统的 “薄弱环节”，而 HEATag 恰巧在这样 “薄弱环节” 上表现了胜机。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸组织开展，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞这样不仅能被明确判别，大部分主耍上皮细胞的类型的聚类分析法结杲都流畅可辨。

更令人惊喜的是HEATag对浮游生物体生物体的兼容性测试性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 条型码与种群转录组极具较高相同性，沒有突然出现因高盐生态引发的 “标上发挥不了作用”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可达成喂奶爬行动物企业样例众多 scRNA-seq 深入分析

Fig4: HEATag可满足剥好深海无脊椎骨软体动物丰富 scRNA-seq 介绍

HEATag与细胞膜的结合起来不用诱发转录组的偏态影响

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在实现标记图片工作任务的一起，不可能对事后的转录类物质析从而造成不干扰，可以保障了科学研究数据资料的实在性。

Fig5: HEATag也不会关系范例的 RNA 体现状态

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未来是什么可期

HEATag 能为单肿瘤细胞论述有哪些？

HEATag 的价值观，远不是于 “搞定图标状况”，它的灵抗逆性高性和普遍意义，将要为单受损细胞调查张开很多也许性

从app场面看来

HEATag 能重叠从 “方便比浅析”（如癌结构性与没问题结构性、口服药清理与参考）到 “大投资额科技研究”（如结构性细胞核膜图谱编写、高通芯片量淘汰）的全区间各种需求。根据 PIP-seq、Stereo-cell 等新方法可优化方法的发展壮大，HEATag 还能进1步提高自己单细胞核膜科技研究的通量，保驾护航科技研究公司开设更强投资额的创业项目。

从跨业务领域提升空间去看

HEATag 仅仅适合于转录组学，还能与表观表观遗传组学、蛋清质组学、区域空间组学等方法运用，借助制作字段和寡核苷酸回文序列，HEATag 不错快些带入各种不同的组学工艺流程，不不良影响走势截获厚度。同一时间，基本概念HEATag还不错发展方向单细胞膜糖组学科研方法。

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达成合作动态的

拜谱生物体与陈凯博士生导师实现目标初始合作协议有意向的

需要青睐的是，在 HEATag 技艺工艺展示出硕大广泛采用潜质的底色下，拜谱大海浮游生物工程生物工程已与东莞地区大海完美与水利东莞试验室（武汉）陈凯硕士生导师促成进行合伙意项。两人之间规划包围 HEATag 技艺工艺的产业群化下地、科学深入分析和转化了等路径进行深度的协同合作，积极推动这种低直接费用、跨鱼类的单组织图标技艺工艺更迅速广泛采用于具体情况科学深入分析动画场景，为更高试验室能提供高效能、金钱的单组织深入分析生产工具，推助科学深入分析工作任务者在组织大海浮游生物工程生理学、大海大海浮游生物工程生理学、的疾病工作机制等这个领域确认更高达到